北京协和医院
三级甲等综合医院国营
北京协和医院是集医疗、教学、科研于一体的现代化综合三级甲等医院,是国家卫生健康委指定的全国疑难重症诊治指导中心,最早承
(1)用0.05mol/L碳酸盐缓冲液稀释t-PA抗体。
(2)用稀释缓冲液稀释抗体-POD结合物。
(3)用基质缓冲液溶解邻苯二胺(8mg/ml),并加入10μl30%H2O2。
(4)将t-PA标准倍比稀释成10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125IU/ml。
(5)标本稀释:1份柠檬酸钠抗凝血浆加5份稀释液。如果估计t-PA值增高,血浆作1∶10稀释。
(6)用稀释之t-PA抗体包被ELISA反应板,每孔200μl,温育过夜,然后用洗涤液洗3次。
(7)加标准/标本200μl,温育1h后,同上洗涤3次。
(8)加过氧化物酶抗体复合物200μl,温育1h后,同上洗涤3次,洗后立即加基质。
(9)每孔加基质200μl,显色10~15min。
(10)加硫酸(3mol/L)50μl或盐酸(1mol/L)100μl,10min中止反应,于492nm,2h内比色,以稀释缓冲液为本底。
(11)据吸光度读数由标准曲线查得t-PA含量。
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