总胆汁酸

总胆汁酸注意事项

(1)血清中LD在其底物存在下(血清中含有一定量的乳酸)也可还原NAD+为NADH，产生高空白值。本法中加入丙酮酸钠，抑制LD活性，可有效地降低空白吸光度。

(2)反应混合物中各成分浓度为：

3α-HSD5U/L

黄递酶500U/L

NAD+1mmol/L

NTB0.2g/L

pH7.50

(3)反应混合物的吸光度受蛋白质影响，故甘氨胆酸钠标准液配制于混合血清中。混合血清中原有胆汁酸及其他可能参与反应的物质需设P管消去。

(4)3α-HSD制品中含有二硫苏糖醇(di-thiothreitol，DTT)，酶制剂用量过多时可影响NTB的还原。

(5)本法线性达250μmol/L。如血清胆汁酸超过此值应作适当稀释。

(6)NoigenET-180是一种非离子表面活性剂，化学名为聚氧乙烯油醚(polyoxy-ethyleneolylether)，为日本京都Dai-ichiKo-gyoSeiyaku公司产，加入反应混合物中可防止沉淀，不影响3α-HSD及黄递酶活性，不影响本测定系统的敏感性。

(7)血清中的TBA含量较低，标本中含大量的干扰物质，其中最主要的是乳酸脱氢酶(LDH)。LDH能影响NAD+的还原反应，由LDH生成的NADH往往比由3α-HSD催化TBA参与的反应生成的NADH量要大的多。由于各类肝炎均可引起血清LDH升高，因此测定中必须消除LDH的影响，方法有：血清67℃加温30min、加草酸作为LDH的封闭剂、碱或酸处理、或用丙酮酸钠抑制LDH活性等，其中以丙酮酸钠法最好。其它还原性物质的干扰通过设立双试剂，样品先和不加3α-HSD的体系孵育，使样品中的干扰物质反应，然后加入3α-HSD，使TBA反应，可排除干扰。