北京中科白癜风医院
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取材:血液
抗浸出性核抗原抗体的测定原理:
(1)对流免疫电泳法:为经典的检测抗ENA抗体(主要包括抗RNP和抗Sm两种抗体)的方法。其原理是于琼脂糖凝胶板成对打孔,将待测血清加至阳极侧孔内,于电场中泳动20min,再于阴极侧孔内加ENA抗原.继续电泳30min,若待测血清中有相应的抗体存在,即可在两孔之间的适当位置形成沉淀线。据此来判断抗ENA抗体的有无。该法主要用于检测抗Sm和抗U1-RNP抗体,其优点是较琼脂糖扩散法敏感、快速,可于2h观察结果。
(2)免疫印迹法:将ENA抗原进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),使所含多肽抗原分离;再用电转印法将抗原转印于硝酸纤维素膜上。将待测血清与膜条上的抗原反应,用酶标记抗人IgG作为二抗,加酶底物溶液显色。根据膜条上显色区带的位置,参比阳性对照,即可判断有无某种抗ENA多肽抗体的存在。此法可一次检测抗Sm、抗U1-RNP、抗SS-A、抗SS-B、抗Jo-1、抗Scl-70和抗核糖体(Rib)等7种多肽抗体。
(3)间接免疫荧光法:实验基质多采用Hcp-2细胞或灵长类动物肝脏的冷冻切片,其原理可参看本章抗核抗体测定,分别出现各自特定的免疫荧光模式(表1)。
试剂:同间接免疫荧光法。
操作方法:同间接免疫荧光法。
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