北京中科白癜风医院
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抗SS-A(Ro)抗体的测定原理:用间接免疫荧光法检测时,抗SS-A/Ro、抗SS-B/La阳性结果表现为核的细斑点型免疫荧光,但抗SS-A/Ro引起的荧光亮度较弱。其操作与原理均与抗核抗体检测相同。双向免疫扩散法仍为抗SS-A/Ro、抗SS-B/La的常用检测方法,但敏感性不高。目前常用免疫印迹法,其原理可参看抗Sm抗体测定。最近也有人用基因重组的52kD和60kD蛋白质建立ELISA法测定抗SSA/Ro抗体,用重组48kD蛋白质建立ELISA法测抗SS-A/La抗体,其敏感性较之免疫扩散法约高千倍,但因特异性问题(重组抗原中常含有细菌产物)未广泛应用。一种敏感性和特异性都很高的方法是放射免疫沉淀法,此法是用放射性36S-蛋氨酸或32P-正磷酸盐标记组织培养细胞,标记上36S的代表所有蛋白质,标记上32P的代表磷酸化蛋白,此外,细胞内RNAs也标记上32P。将待测血清与标记上放射性核素的组织细胞提取物混合,抗体与标记抗原反应,形成免疫复合物,用葡萄球菌A蛋白使免疫复合物沉淀,溶解后行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、放射自显影,与自身抗体结合的放射性标记核抗原形成的条带即可显现出来,参照标准品形成的条带进行分析,即可做出诊断。此法目前还只限于实验室研究。
试剂:血清1ml。
操作方法:
(1)沉淀法:与抗Sm、抗RNP或抗SS-B等类似的检测方法不同,小牛、兔、胸腺提取物由于没有足够浓度的Ro抗原,不能用于免疫双扩散和反相免疫电泳,而主要从人脾组织或人培养细胞(WI-L2)获得。沉淀带与参考血清相同,核实为SS-A特异性。
(2)免疫印迹法:抗原采用细胞培养物如HeLa、MolT-4。当与参考血清有两条相同典型带(60×103和52×102)时,可确证为抗SSA(Ro)阳性。
(3)ELISA:可用亲和纯化或重组52×103和60×103蛋白,或相对纯化的hY-RNP颗粒作抗原。
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