北京中科白癜风医院
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阿米巴原虫抗原和抗体的测定原理:免疫荧光技术的原理是利用物质吸收光能后,产生激发态而发光的特性。将具有这种特性的荧光素(异硫氰酸荧光黄或罗丹明B200)用化学方法结合在特异的抗体(抗原)的分子上,又不损害其抗体或抗原活性的一种荧光显微镜下的示踪技术。抗体和抗原的结合是高度特异的,所以只要知道其中的一个因子,也就知道了另一个因子。免疫荧光技术就是利用上述两种特性,把不可见的抗原抗体的反应(一抗)与被荧光素标记的抗体(抗抗体)反应,变为肉眼可见的荧光,再根据组织学和细胞学定位来判断特异荧光所在。在荧光显微镜下我们所能见到的亮绿荧光,不是标本本身(无色)发出的,而是荧光物质受到激发后而发出的亮绿荧光。荧光标记抗体技术称荧光抗体技术,荧光标记抗原技术称荧光抗原技术。
试剂:
(1)荧光标记抗体(或抗原)。
(2)0.01mol/LpH7.2PBS缓冲液。
(3)组织或细胞基质片。
(4)缓冲甘油(pH7.2)。
(5)荧光显微镜。
(6)湿盒。
操作方法:
(1)抗原(或抗体)基质片(各种组织冰冻切片或培养细胞等)基质片从冰箱取出立即风干。使用前经无水乙醇或丙酮、甲醇等固定剂处理(根据实验要求选择固定剂)。一般固定3~15min,室温晾干。
(2)被检物(血清、脑脊液或其他渗出物等),根据需要用PBS适当稀释(1∶5或1∶10)滴于抗原基质片上,置室温或37℃温箱反应30min~1h。
(3)0.01mol/LpH7.2PBS冲洗15min(更换PBS3次)。
(4)加荧光标记抗体,置室温或37℃温箱30min~1h。
(5)PBS冲洗同(3)。
(6)缓冲甘油(pH7.2)封片,荧光显微镜镜检。
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