北京中科白癜风医院
其他皮肤病医院国营
北京协和医院是集医疗、教学、科研于一体的现代化综合三级甲等医院,是国家卫生健康委指定的全国疑难重症诊治指导中心,最早承担
(1)直接免疫荧光法
①取肝素抗凝外周血,用淋巴细胞分层液获得单个核细胞,Hank液配成(1~2)×106细胞/ml。
②取1ml细胞悬液加入5ml塑料管中,离心2000r/min,2min,弃上清。
③加FITC-CD4、FITC-CD8各20μl,对照管加mIgG-FITC,4℃反应30min。
④Hank液洗2次,2000r/min,2min。
⑤流式细胞计分析。
(2)间接免疫荧光法
①分离PBMC,调至(1~2)×106细胞/ml。
②取1ml细胞悬液于5ml塑料管中,离心2000r/min,2min,弃上清。
③加抗CD4、CD8单克隆抗体各100μl,对照管加抗体稀释液或正常小鼠IgG,4℃反应30min。
④Hank液洗2次,离心2000r/min,2min,弃上清。
⑤各加50μlFITC-IgG,4℃反应30min。
⑥Hank液洗2次,2000r/min,2min。
⑦滴片,荧光显微镜观察或流式细胞计分析。
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三级甲等综合医院国营
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