北京中科白癜风医院
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化验取材:血液
抗溶血性链球菌“O”试验的原理:链球菌溶血素O对氧不稳定,在空气中迅速失去溶血活力,检测ASO时,先将链球菌溶血素O还原,恢复其溶血活力,再与不同稀释度的病人血清混合,继加O型红细胞或兔红细胞悬液作为指示剂。如溶血素O被血清中的相应抗体所中和,则加入的指示红细胞不被溶解。如血清中无相应抗体或抗体量不足以中和加入的溶血素,则发生不同程度的溶血现象。
试剂:
(1)溶血素O:有商品供应,按说明书稀释后使用,溶血素O活性(结合单位)的标定必须用丹麦国立血清研究所制备的WHO标准抗溶血素O抗体精确滴定。溶血素O对热不稳定,短期保存可存放于4~10℃冰箱,几个月以上应低温冰冻贮存。
(2)ASO缓冲液:取磷酸氢二钠十二水合物9.06g,磷酸二氢钠二水合物10.89g,氯化钠4.6g,使溶于少量蒸馏水后并补足至1000ml,pH值为6.5。
(3)红细胞悬液:取枸橼酸钠抗凝的兔或O型人血,用ASO缓冲液洗涤3次,最后1次洗涤后,必须经2000r/min离心10~15min,离心后尽可能吸尽无色的上清液,并以ASO缓冲液配制成5%悬液,用时轻轻摇匀。
(4)还原剂:商品还原片剂可按说明书使用,其主要成分是2∶1的无水亚硫酸氢钠和无水亚硫酸钠。也可在临用前将ASO缓冲液以2mol/L氢氧化钠校pH值到8.0,加入L-半胱氨酸盐7g/L使溶解即成。
操作方法
(1)用ASO缓冲液将血清标本稀释成1∶100和1∶500二个稀释度。
(2)按说明书建议配制1结合单位/ml的还原溶血素O,准确吸取一定量溶血素,首先用还原剂溶液稀释到最终体积的1/3左右,放置15min,使溶血素充分还原,然后准确稀释到指定体积,在45min内使用。
(3)取70×100mm小试管按表1所列步骤操作,并以已知ASO单位的标准血清作对照。
(4)结果报告:主要观察上清液是否有溶血现象,以呈完全不溶血的血清最高稀释倍数为该标本的ASO单位/ml。
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